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生化實驗室15大常識

標(biāo)簽 離心機 移液器 ** cc 克隆載體

[導(dǎo)讀] 生化實驗室15大常識。

　　1.在重蒸酚中為什么加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?

　　保存在冰箱中的酚，容易被空氣氧化而變成粉紅色，這樣的酚容易降解DNA，一般不可以使用。為了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫，不僅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。

　　2.如何將不同構(gòu)型的質(zhì)粒DNA區(qū)別開?

　　由于不同構(gòu)型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同，cccDNA的泳動速度*快，通過凝膠電泳方法可將不同構(gòu)型的DNA區(qū)別開。

　　3.用酚-氯仿抽提細(xì)胞基因組DNA時，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，為什么?

　　異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產(chǎn)生。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩(wěn)定。

　　4.用乙醇沉淀DNA時，為什么加入單價的陽離子?

　　用乙醇沉淀DNA時，通常要在溶液中加入單價的陽離子，如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的負(fù)電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀。

　　5.在提取RNA時經(jīng)常使用異硫氰酸胍，有什么作用?

　　RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細(xì)胞結(jié)構(gòu)迅速被破壞，使RNA從細(xì)胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細(xì)胞內(nèi)的RNA酶失活，使釋放出的RNA不被降解。

　　6.蛋白印跡中封閉液的作用?

　　封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。

　　7.DNA通常保存在什么緩沖液中?

　　采用TE緩沖液，Tris-HCl的緩沖系統(tǒng)，加入EDTA可以螯合二價金屬離子進(jìn)而抑制依賴于二價金屬離子的DNA酶的活性，對DNA起到保護作用。

　　8.在酶切反應(yīng)緩沖液中為什么加入BSA?

　　通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護作用。

　　9.簡單的克隆載體必需包括什么?

　　復(fù)制起點;選擇標(biāo)記：主要是抗性基因;多克隆位點：便于外源DNA的插入。

　　10.用酚抽提細(xì)胞DNA時，有什么作用?

　　使蛋白質(zhì)變性。

　　11.在分離DNA時，要使用EDTA，為什么?

　　EDTA是金屬離子螯合劑，螯合二價離子，抑制核酸酶的活性。

　　12.在分離DNA過程中，造成DNA分子斷裂的因素有哪些?

　　核酸酶降解;化學(xué)降解;物理剪切。

　　13.使用離心機應(yīng)注意什么?

　　首先應(yīng)該根據(jù)自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉(zhuǎn)子以及離心管，使用離心機時的工作轉(zhuǎn)速不應(yīng)該超過離心機、轉(zhuǎn)子以及離心管的*大允許轉(zhuǎn)速。離心前注意嚴(yán)格平衡樣品。安裝轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)子蓋要規(guī)范、準(zhǔn)確。離心時要留人看守，發(fā)現(xiàn)離心機異常應(yīng)立即關(guān)閉離心機。離心結(jié)束后要安放好轉(zhuǎn)子。

　　14.分子生物學(xué)實驗室常用的**方法有哪些?

　　高壓蒸汽**、干熱**、化學(xué)藥劑**、過濾**。

　　15.使用移液器有哪些注意事項?

　　垂直吸液、慢吸慢放;選擇合適的量程范圍，不能超過量程使用;選擇與移液器匹配的槍頭，頭時不要用力太猛;移液器每日用完后，應(yīng)旋到*大刻度。